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BrainBits星形胶质细胞全脑培养试剂盒

简要描述:BrainBits星形胶质细胞全脑培养试剂盒代理——北京百奥创新科技有限公司,现货供应BrainBits试剂盒,更多BrainBits品牌产品介绍,欢迎咨询!

  • 产品型号:型号齐全
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-10-25
  • 访  问  量:433
详情介绍

一、BrainBits星形胶质细胞全脑培养试剂盒内容

该试剂盒内含:1 E18小鼠全脑、12mL NbAstro6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 1个带橡胶球的火抛光移液、1PDL涂层盖板

二、BrainBits星形胶质细胞全脑培养试剂盒产品简介

该试剂盒包含从新鲜组织开始培养所需的一切。E18组织用2mlB27THRYVE胚胎储存介质运送。立即使用组织以获得最高的细胞产量,但组织可在4-8°C下保存一周。这个试剂盒是完mei的研究人员刚刚开始或为那些谁想要的可靠性。非常适合课堂教育,为下一代研究人员提供实践方法。

三、产品操作

(1)细胞分散(无菌操作箱中的室温)

A、 2 毫升移液管小心地将组织转移至木瓜蛋白酶中,尽量减少培养基的转移。将 THRYVE 胚胎完quan培养基转移至一个新的无菌 15 毫升管中,以备第三步使用。

B、将组织和木瓜蛋白酶在30下孵育 10 分钟。每 2 分钟轻轻搅拌一次,或者使用加热振荡板,温度为30,转速为 150 /分钟。

C、 2 毫升移液管从木瓜蛋白酶中取出含有少量培养基的组织,并返回步骤 A中的 THRYVE 胚胎完quan培养基中。

D、使用涂有硅油的巴斯德移液管,研磨组织不超过 10 次,或分散 90%的组织,避免产生气泡。

E、让未分散的颗粒静置 1 分钟。可选:向细胞悬液中加入 400 微升 1 毫克/毫升的 DNase I 溶液,并在室温下孵育 15 分钟,每 5 分钟轻轻搅拌或摇晃试管。

F、将含有分散细胞的细胞悬液转移到无菌的 15 毫升管中。留下约 50 微升含有碎片的 THRYVE 胚胎完quan培养基。可选:通过 70 微米的细胞过滤器过滤细胞溶液。

G、 1100 /分(200×G)离心 1 分钟。弃去上清液,留下约 50 微升含有沉淀物的 THRYVE 胚胎完quan培养基。

H、分散细胞团(用手指或试管轻弹管底),然后将细胞团重新悬浮于 1 毫升的星形胶质细胞培养基(NbAstro™)中。

I、 20 微升细胞溶液分装到含有 80 微升台盼蓝(1:5 稀释)的 0.5 毫升管中。

J、使用血细胞ji数器(计算细胞/毫升)或采用当前的实验室程序来计数细胞。 2细胞培养(无菌室中的室温)

A、 0.2 毫升/平方厘米的 NbAstro™ 稀释细胞,并以 7500 个细胞/平方厘米或期望的浓度进行铺板。注意:以更高的密度铺板会导致神经元和星形胶质细胞的混合。

B、孵化时间37 5%的二氧化碳29%的氧气295%的湿度(或环境湿度O2 )

C、  3 - 4 天用新鲜的、37℃、二氧化碳平衡的 NbAstro 更换一半的培养基。

D、1.5 2 周后,星形胶质细胞将有 90%融合,准备收获或传代。

E、若要转移到神经元培养物中:提前 24 小时,将一半的培养基更换为 Neurobasal®/B27®/GlutaMAX™NbActiv1™)。

F、对于扩增:用 0.25%胰蛋bai酶在 THRYVE 胚胎培养基中收获细胞,(37 5 分钟)。

G、若要抑制胰dan白酶,请使用dan蛋白酶抑制剂或血清。

3活力测定:

A 37 平衡yan溶液(0.2 毫升/平方厘米底物)冲洗两次。

B 15mg/ml 荧光素二乙酸酯的丙酮储备液和 4.6mg/ml 碘化丙啶的水溶液储备液中制备染色液,将每种溶液稀释 15 微升至 1.5 毫升的 HBSS 中(1:100 稀释)。

C将步骤 B 中的 20 微升染料混合物添加到步骤A中添加的每 0.2 毫升的 HBSS 中(1:10 稀释)。

D 1 分钟后,使用适合荧光素荧光的蓝色激发来计数活细胞(绿色细胞)。使用绿色激发来计数碘化丙啶荧光(小红色细胞核)的死细胞。

E活力 =(绿色细胞/单位面积)/(单位面积上铺板的总细胞数) 或者存活率 = 绿色细胞/(绿色细胞 + 红色细胞)

BrainBits星形胶质细胞全脑培养试剂盒



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